Nyligen avled 69 personer när två höghastighetståg kolliderade på höghastighetslinjen i Urda (Toledoprovinsen) mellan Madrid och Sevilla som invigdes 1992.
Den pågående utredningen fokuserar på flera orsaker till olyckan.
Under fredagen kommer den centrala utredningsavdelningen UCO (Unidad Central Operativa) vid Guardia Civil att begära in dokumentation och underlag från ADIF (Administrador de Infraestructuras Ferroviarias) som förvaltar järnvägsstrukturen i Spanien samt statens järnvägssäkerhetsbyrå AESF (Agencia Estatal de Seguridad Ferroviaria) rapporterar El País.
Guardia Civil utreder om EU-medel har förskingrats vid underhåll av höghastighetsjärnvägen.
Det är den andra utredningen på kort tid där myndigheter granskar hur EU-medel har använts i samband med underhåll av järnvägen.
Den europeiska Åklagarmyndigheten som är ett oberoende organ som ansvarar för att utreda brott mot EU:s ekonomiska intressen har sedan tidigare en utredning igång om byggarbetet på Spaniens höghastighetsjärnväg.
I mars avslöjades det att en utredning inleddes den 30 januari om eventuellt bedrägeri med EU-medel som avsatts för underhåll av samma höghastighetslinje. Utredningen inleddes 11 dagar efter tågolyckan i Adamuz (Córdoba) där 46 människor miste livet.
Båda utredningarna fortskrider parallellt med de utredningar som genomförs av en domstol i Orgaz (Toledo) och en annan i Montoro (Córdoba) för att fastställa orsakerna till båda olyckorna och vem som bär ansvaret för olyckorna.
Europeiska Åklagarmyndigheten fokuserar på om EU-medel har förskingrats.
I somras dömdes den tidigare transportministern José Luis Ábalos till 24 års fängelse för organiserad brottslighet, mutbrott och förskingring. Domen kom i kölvattnet i en av de korruptionsaffärer som socialistpolitiker är indragna i.
I tisdags avgick Óscar Puente som transportminister i Spanien.
